摘要:
引言BLCAP基因 (又称为bc10基因 )是国外学者在研究侵袭性膀胱癌时发现的[1], 其与细胞侵袭性相关, 具有抑癌基因的部分特征, 考虑是一种新的抑癌基因[2 ] 。该基因在人骨肉瘤细胞内有表达, 并且在高转移亚系中表达水平明显降低[4] 。本研究克隆BLCAP基因, 并构建真核细胞表达质粒, 为进一步研究其功能提供材料。1 材料与方法1.1 材料 RPMI 16 4 0、Trizol、G4 18、cDNA第一链合成试剂盒、WizardTMMinicolumn试剂盒及EcoRI、XhoI、T4DNA等试剂购自鼎国公司。pcDNA 3.1逆转录病毒载体由第四军医大学冯骥良博士惠赠, 宿主菌JM10 9由本所保存。1.2 细胞培养、提取总RNA、反转录cDNA 人骨肉瘤细胞系SOSP - 96 0 7[3 ]用含 10 %新生牛血清的RPMI 16 4 0培养基常规培养, 达 1.0× 10 7后收获细胞, 用Trizol试剂一步法抽提总RNA, 用Clontech试剂盒反转录为cDNA。1.3 RT PCR、回收目的片段 根据BLCAP基因序列设计特异性引物[1], 第一链 5' gaattcatgt...
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