摘要:
目的：探讨C1q样蛋白4（C1ql4）在调控乳腺癌干细胞特性中的作用机制。方法：采用实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polyme- rase chain reaction, qRT-PCR）检测C1ql4在人源三阴型乳腺癌细胞系及正常乳腺上皮细胞系中的表达情况；构建敲低或过表达C1ql4的乳腺癌细胞系，用qRT-PCR和Western Blotting法检测验证敲低或过表达转染效果；采用Western Blotting法检测敲低和过表达C1ql4的乳腺癌细胞系中AKT、IKK、IκB的磷酸化水平；在敲低C1ql4的MDA-MB-231细胞加入AKT激活剂，过表达C1ql4的MCF-7细胞分别加入AKT抑制剂、IKK抑制剂、IκB抑制剂和NF-κB核转运抑制剂，Western Blotting法检测各组细胞中NF-κB核/质比，通过免疫荧光双染法检测NF-κB核转位情况，qRT-PCR法检测NF-κB靶基因TNF-α和IL-1β的表达情况；同时再次采用成球试验检测细胞成球能力、通过流式细胞仪检测各组细胞中干性表型细胞（CD44
+/CD24
-/low）亚群比例的变化。结果：人乳腺癌细胞系中C1ql4的表达水平明显高于正常人乳腺细胞；MDA-MB-231乳腺癌细胞中转染C1ql4的小干扰RNA（small interfering RNA, siRNA）后，C1ql4表达水平显著降低（P<0.05）；在MCF-7乳腺癌细胞中转染过表达C1ql4的质粒，C1ql4表达水平显著升高（P<0.05）Western Blotting法结果显示，敲低C1ql4的MDA-MB-231细胞pAKT/AKT、pIKK/IKK、pIκB/IκB的比值明显下降（均P<0.05）；过表达C1ql4的MCF-7细胞pAKT/AKT、pIKK/IKK、pIκB/IκB的比值明显升高（均P<0.05）；挽救实验结果表明，在敲低C1ql4的MDA-MB-231细胞加入AKT激活剂后，NF-κB转位到细胞核内增加，NF-κB核/质比、TNF-α和IL-1β的表达量、成球能力及干性表型细胞比例均显著回升（均P<0.05）；过表达C1ql4的MCF-7细胞中分别加入AKT抑制剂、IKK抑制剂、IκB抑制剂和NF-κB核转运抑制剂后，NF-κB转位到细胞核内数量减少，NF-κB核/质比、TNF-α和IL-1β的表达量、成球能力及干性表型细胞比例均有所回降（均P<0.05）。结论：C1ql4通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路促进NF-κB从细胞质到细胞核的转位，并促进乳腺癌细胞干性表达。
【关键词】乳腺癌；干细胞特性；C1q样蛋白4；核转录因子κB
中图分类号：R73-37 文献标志码：A
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