0   引言

肝细胞癌是全球第六大常见癌症，同时也是癌症相关死亡的第三大原因。数据显示2020年全球新增肝癌病例超过900000例^[1]。目前，甲胎蛋白（alpha-fetoprotein, AFP）是临床上诊治肝细胞癌最常用的生物标志物，但其特异性较差，筛查和诊断价值并不高^[2-4]。因此，寻找新的肝细胞癌早期诊断标志物是临床实践的迫切需要。穿透素-3（pentraxin-3, PTX3）是由8个亚基组成的同源多聚糖蛋白，属于正五聚蛋白家族^[5]。功能上，PTX3在炎性反应、组织修复及肿瘤免疫中发挥重要作用^[6-8]。近年来有研究表明，PTX3也与某些类型癌症的预后有关，比如结直肠癌^[9]、肺癌^[10]、胃癌^[11]等。此外，PTX3已被证明能够促进肝癌的进展，且肿瘤组织PTX3高表达与肝癌患者的不良预后具有相关性^[12]。但血清中PTX3水平在肝细胞癌中的作用仍待进一步研究，本研究旨在分析血清中PTX3水平在肝细胞癌中的诊断价值，以期为此类疾病的早期诊断提供参考。

1   资料与方法

1.1   一般资料

选择2019年1月—2020年7月平顶山市第一人民医院收治的78例肝癌患者，其中27例病因与非酒精性脂肪肝有关、30例合并乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）感染、8例酒精性肝病和13例隐源性肝癌。根据《原发性肝癌诊疗规范》^[13]中所述中国肝癌的分期方案（China liver cancer staging, CNLC）进行分期：Ⅰ期20例（Ⅰa期13例、Ⅰb期7例）、Ⅱ期27例（Ⅱa期6例、Ⅱb期21例）、Ⅲ期31例（Ⅲa期4例、Ⅲb期27例）。纳入标准：（1）根据病史、临床症状、实验室、影像学及病理学检查确诊为原发性肝癌；（2）采集血液前未接受放化疗及免疫抑制剂治疗；（3）无家族遗传病和精神疾病史。排除标准：（1）有自身免疫性肝炎、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病及其他系统严重疾病者；（2）妊娠或哺乳期阶段妇女。同时选取本院健康体检者78例作为对照组。本研究获得医院伦理委员会批准，所有患者均签署知情同意书。

1.2   实验方法

采集患者的清晨空腹静脉血5 ml，于4℃离心机中以3 000 r/min的速度离心15 min后将上清液置于-80℃冰箱保存待检。采用酶联免疫吸附法检测血清PTX3水平，试剂盒购自上海艾博抗贸易有限公司，操作步骤根据试剂盒中提供的说明书进行。

1.3   统计学方法

采用SPSS21.0软件进行数据统计学分析，计量资料用（x±s）表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用方差分析。计数资料的组间比较采用卡方分析。采用MedCalc 20.009软件构建受试者工作特征（receiver operating characteristics, ROC）曲线。检验水准α设为0.05。

2   结果

2.1   两组研究对象的一般资料比较

本研究共纳入肝癌患者78例，健康对照组78例。肝癌组男45例、女33例，平均年龄为（49.44±8.21）岁；健康对照组男42例、女36例，平均年龄为（48.98±9.34）。两组研究对象在年龄和性别资料上差异均无统计学意义（P > 0.05），见表 1。

表  1  两组一般资料比较

Table  1  Comparison of basic characteristics between two groups

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2.2   两组血清中PTX3表达的比较

肝癌组血清PTX3表达水平为14.88±2.13，健康对照组血清PTX3表达水平为5.24±0.49。两组间比较差异有统计学意义（t=25.631, P=0.002）。

2.3   不同分期肝癌患者血清中PTX3表达的比较

Ⅰ期肝癌组血清PTX3水平高于Ⅱ期组，Ⅱ期肝癌组血清PTX3水平高于Ⅲ期组，差异有统计学意义（P < 0.05），见表 2。

表  2  不同分期肝癌患者血清PTX3表达水平比较(x±s)

Table  2  Comparison of serum PTX3 expression levels in patients with different stages of hepatocellular carcinoma (x±s)

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2.4   PTX3水平与肝癌患者病理特征的关系

肿瘤直径≥5 cm患者血清中PTX3水平明显低于肿瘤直径 < 5 cm患者（P < 0.05）。合并HBV感染的肝癌患者血清中PTX3水平高于无HBV感染的患者（P < 0.05），见表 3。

表  3  血清PTX3水平与患者病理特征的关系(x±s)

Table  3  Relation between serum PTX3 level and pathological characteristics of patients with hepatocellular carcinoma (x±s)

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2.5   PTX3对肝癌的诊断价值

ROC曲线分析结果显示：血清PTX3水平辅助诊断肝癌ROC曲线的AUC为0.938，95%CI为0.888~0.970，敏感度为88.5%，特异性为84.6%，约登指数为0.731，可见其对肝癌诊断的预测能力具有较高的准确性，见图 1。

图  1  ROC曲线分析血清PTX3水平对肝癌的诊断价值

Figure  1  Prognostic value of serum PTX3 for hepatocellular carcinoma analyzed by ROC curve

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3   讨论

肝癌是一种发生于肝脏的常见恶性肿瘤^[14]，分为原发性和转移性肝癌，以原发性更多见。肝癌发病隐匿，患者早期无特异性症状，多数患者在中晚期寻求诊断和治疗，往往错过最佳的治疗时间^[15]。因此，寻求一种操作简便、非介入性且重复性好的早期肝癌筛查诊断方法一直受到关注。近年来，研究表明多种血液标志物对肝癌的诊断具有良好的预测价值^[16-18]。

PTX3又称肿瘤坏死因子刺激基因14（tumor necrosis factor-stimulated gene 14, TSG-14），与C反应蛋白（C reactive protei, CRP）同属于一种在进化中高度保守的正五聚蛋白家族^[19-20]。结构上，PTX3有一个与其他已知蛋白无序列相似性的N端结构域和一个C端结构域，由8个亚基组成，含有381个氨基酸^[19]。PTX3已在某些肿瘤中被证实是一种外在抑癌因子，通过调节巨噬细胞介导肿瘤进展^[7]。然而，PTX3在癌症中是否起到保护或促进作用仍未完全明确。但有研究发现在肝细胞癌中PTX3高表达并通过驱动上皮-间充质转化加速肿瘤转移，提示其与预后不良相关^[12]。这提示血清中PTX3水平可能与肝癌的发展相关。

肝癌的诊断主要依靠影像学，但由于影像学检查的放射性，降低了用于肝癌筛查的可能性；又由于影像学检查的敏感度，降低了早期诊断的可能性。相反，血清标志物由于简便快速且成本低廉的特点，普遍被患者所接受。目前，血清AFP水平的检测是最常用的诊断方法。有研究显示，血清AFP水平在部分良性肝病患者中也会处于高水平，但其并未出现肝癌的迹象，而在少数HCC患者AFP呈阴性或水平较低，这导致AFP对肝癌的误诊率较高^{[2, 21]}。因此，临床实践迫切需要发现一种新的肝癌诊断生物标志物。

本研究将肝癌患者及健康体检者作为研究对象，分析血清中PTX3表达水平，并采用ROC曲线分析血清PTX3对肝癌的辅助诊断价值。结果显示，肝癌患者血清中PTX3水平显著升高，提示通过测定机体血清中PTX3水平可能有助于诊断肝细胞癌。Deng等^[20]研究表明慢性HBV感染患者血清PTX3水平高于健康对照者，而HCC患者血清PTX3水平高于慢性HBV感染患者，与本研究结果相类似。通过构建裸鼠肝癌模型^[12]发现PTX3与上皮间质转分化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）相关，可能通过激活EMT加速肝癌细胞的增殖和生长，这提示PTX3可能通过EMT参与调控肝癌进展。有研究结果显示，随着肿瘤分期的增加，肝癌患者血清PTX3水平相应降低，Feder等^[22]研究发现肝癌患者中血清PTX3水平并不随着TNM分期而相应增加，而Song等^[12]应用免疫组织化学方法检测210例HCC患者肿瘤组织及癌旁组织中的PTX3水平，发现其在肿瘤组织中的表达异常升高，且与肝癌TNM分期显著相关。此外，现有研究证明在癌症中PTX3与补体C1q和H因子相互作用，激活并调节补体级联，从而在人体内作为外源性抑癌因子抑制肿瘤相关炎性反应^[23]。不同研究相悖的结果提示PTX3控制肿瘤发展过程中可能有多种因素参与，或许存在一种还未阐明的复杂的调控网络，具体机制仍待进一步研究。

本研究进一步采用ROC曲线分析血清PTX3对肝癌（包括HBV感染者和非HBV感染者）的辅助诊断价值，AUC为0.938，说明血清PTX3表达水平对肝癌的诊断具有较高的准确性，但样本量较少，可能存在一定的偏移，需进一步扩大样本量进行深入研究。