Effect of SMAC Gene on Sensitivity of Lung Adenocarcinoma Cells to Paclitaxel and Cell Viability Based on caspase-3/Bcl-2/Bax Signaling Pathway
-
摘要:目的
基于caspase-3/Bcl2/Bax信号通路探究SMAC基因对肺腺癌细胞紫杉醇敏感度及细胞活性的影响。
方法建立肺腺癌紫杉醇耐药细胞株A549/Taxol,将细胞分为pcDNA-NC组(转染pcDNA-NC空白载体)、pcDNA-SMAC组(转染pcDNA-SMAC载体)、siRNA-NC组(转染siRNA-NC空病毒载体)和siRNA-SMAC组(转染siRNA-SMAC慢病毒载体)。qRT-PCR法检测细胞中SMAC mRNA表达;MTT法检测细胞敏感度;克隆实验法检测细胞增殖能力;Transwell法检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡能力;Western blot法检测细胞中caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达。
结果肺腺癌A549细胞较BEAS-2B正常细胞中SMAC mRNA表达明显降低(P < 0.05)。pcDNA-SMAC组较pcDNA-NC组细胞中SMAC mRNA表达显著升高(P < 0.05)。和siRNA-NC组相比,siRNA-SMAC组细胞中SMAC mRNA表达显著降低(P < 0.05)。和pcDNA-NC组相比,pcDNA-SMAC组细胞IC50、细胞克隆数、细胞侵袭能力及Bcl-2蛋白和Bcl-2/Bax比值均显著降低,细胞耐药指数逆转倍数为2.51倍,细胞凋亡能力及caspase-3和Bax蛋白表达明显高于pcDNA-NC组(P < 0.05)。和siRNA-NC组相比,siRNA-SMAC组细胞IC50、细胞克隆数、细胞侵袭能力及Bcl-2蛋白和Bcl-2/Bax比值均显著升高,细胞凋亡能力及caspase-3和Bax蛋白表达明显降低(P < 0.05)。
结论高表达SMAC可增加肺腺癌细胞的紫杉醇敏感度、抑制细胞增长和侵袭、促进细胞凋亡,且对caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路有一定调控作用。
Abstract:ObjectiveTo investigate the effect of the SMAC gene on paclitaxel sensitivity and cellular activity in lung adenocarcinoma cells based on the caspase-3/Bcl-2/Bax signaling pathway.
MethodsA paclitaxel-resistant cell line A549/Taxol was established for lung adenocarcinoma, and the cells were divided into four following groups: pcDNA-NC (transfected with pcDNA-NC blank vector), pcDNA-SMAC (transfected with pcDNA-SMAC vector), siRNA-NC (transfected with siRNA-NC empty virus vector), and siRNA-SMAC groups (transfected with siRNA-SMAC lentiviral vector). The SMAC mRNA expression in cells was detected by qRT-PCR; cell sensitivity was detected by MTT; cell proliferation ability was detected by cloning assay; cell invasion ability was detected by Transwell; apoptosis ability was detected by flow cytometry assay; and caspase-3, Bcl-2 and Bax protein expression in cells were detected by Western blot analysis.
ResultsThe SMAC mRNA expression was significantly lower in A549 cells compared with BEAS-2B cells (P < 0.05). The SMAC mRNA expression was significantly higher in the pcDNA-SMAC group than that in the pcDNA-NC group cells (P < 0.05). The SMAC mRNA expression was significantly lower in the cells of the siRNA-SMAC group (P < 0.05) than that in the siRNA-NC group. The SMAC mRNA expression was significantly lower in the cells of the siRNA-SMAC group (P < 0.05) than in the siRNA-NC group. Compared with the pcDNA-NC group, the cell IC50, cell clone number, cell invasion ability, and Bcl-2 protein and Bcl-2/Bax ratio were significantly lower in the pcDNA-SMAC group, the cell resistance index reversal was 2.51-fold, and the apoptosis ability and caspase-3, as well as Bax protein expression, were significantly higher (P < 0.05). Compared with the siRNA-NC group, cell IC50, cell clone number, cell invasion ability, and Bcl-2 protein and Bcl-2/Bax ratio were significantly higher in the siRNA-SMAC group, and apoptosis ability and caspase-3 and Bax protein expression were significantly lower (P < 0.05).
ConclusionHigh expression of SMAC increases paclitaxel sensitivity, inhibits cell growth and invasion, promotes apoptosis in lung adenocarcinoma cells, and has a regulatory effect on the caspase-3/Bcl-2/Bax signaling pathway.
-
0 引言
肺癌是临床中常见的恶性肿瘤之一,非小细胞肺癌(NSCLC)是其常见亚型,包括腺癌和鳞癌等多种类型[1-2]。近年来研究发现,化疗药物可提高大部分肺腺癌患者的生存率,例如紫杉醇、吉西他滨等,但由于大部分肿瘤会发生转移、侵袭和化疗耐药,导致肿瘤患者5年生存率仍较低[3]。由此可见,研究肺腺癌对化疗药物的耐药机制,找出增加化疗药物敏感度的方法是目前需要解决的难点。目前,学者们发现第二线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激活剂(second mitochondria-derived activator of caspases, SMAC)是存在于线粒体中并调节细胞凋亡的蛋白质,通过消除凋亡抑制蛋白家族(IAPs)功能进而促进细胞凋亡[4-5]。诸多研究表明[6],SMAC高表达可促进乳腺癌、胶质母细胞瘤、甲状腺癌等肿瘤细胞的凋亡。还有研究[7]证实,SMAC与肾细胞癌、结直肠癌及肺癌的进展呈负相关。但目前关于SMAC表达对肺腺癌的耐药性的报道较少。研究证实[8],Bcl-2/Bax信号通路介导多种肿瘤细胞凋亡,其中Bax和Bcl-2分别为促凋亡蛋白和抑凋亡蛋白;Bcl-2可通过抑制caspase-3的活性进而抑制细胞凋亡,Bax可通过激活caspase-3活性导致细胞不可逆凋亡[9]。本研究旨在基于caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路探究SMAC基因对肺腺癌细胞紫杉醇敏感度及细胞活性的影响。
1 材料与方法
1.1 细胞株
人肺腺癌细胞株A549和人支气管上皮正常细胞株BEAS-2B均购自中国医科大学附属盛京医院中心实验室。
1.2 试剂与仪器
SMAC基因全长cDNA真核表达载体pcDNA-SMAC、pcDNA-NC空白载体、siRNA-SMAC慢病毒载体、siRNA-NC空病毒载体均购自上海吉凯基因化学有限公司;兔抗caspase-3、Bax、Bcl-2及β-actin一抗、羊抗兔IgG HRP标记的二抗均购自美国Affinity Biosciences公司;紫杉醇(Taxol)购自美国Bristol-Myers Squibb公司;Forma3111 CO2恒温培养箱购自美国Thermo公司;IX71倒置显微镜购自日本Olympus公司。
1.3 细胞培养
将A549和BEAS-2B细胞均培养于含10%胎牛血清的培养基中,加入双抗后正常培养细胞。显微镜观察培养基中的液体,约2天更换1次培养液。待细胞长满培养瓶底部时加入PBS溶液消化细胞,收集处于对数生长期的细胞,以备后续实验所用。
1.4 肺腺癌紫杉醇耐药细胞系的建立
根据文献[10]中逐步增量间歇作用法,建立A549细胞紫杉醇耐药株。取对数生长期A549细胞,培养细胞于含0.1 μg/ml的紫杉醇培养基中,48 h后弃掉培养基,用不含紫杉醇的培养基继续培养细胞。细胞传代后,将A549细胞培养于含0.2 μg/ml的紫杉醇培养基中培养48 h;根据以上方法逐渐增加紫杉醇浓度,直至A549细胞在5 μg/ml紫杉醇中稳定生长且传代时,停止诱导,将得到的A549细胞记为肺腺癌紫杉醇耐药细胞株A549/Taxol。
1.5 细胞转染和分组
取1.4中A549/Taxol细胞,消化后接种于6孔板内,显微镜观察细胞的融合度。当融合度达80%以上时加入无血清培养基终止消化,根据转染试剂说明转染并分组细胞。
将A549/Taxol细胞分为pcDNA-NC组(转染pcDNA-NC空白载体)、pcDNA-SMAC组(转染pcDNA-SMAC载体)、siRNA-NC组(转染siRNA-NC空病毒载体)、siRNA-SMAC组(转染siRNA-SMAC慢病毒载体)。各组细胞均培养24 h。
1.6 qRT-PCR检测细胞中SMAC mRNA表达
取1.3和1.5步骤中的细胞,加入TRIzol裂解液,裂解细胞为细胞悬液,提取细胞悬液中总DNA,反转录为cDNA。将SMAC和内参GAPDH引物(见表 1)瞬时离心,加入去离子水,充分混匀后得到100 μmol/L的贮存液。扩增条件为:95℃ 10 min,95℃ 20 s,60℃ 34 s,共40个循环。用2-ΔΔCT法分析SMAC的表达量。
表 1 引物序列表Table 1 Primer sequence1.7 MTT法检测A549/Taxol细胞耐药性
取各组A549/Taxol细胞接种于96孔板中,培养贴壁,添加终浓度为5 μg/ml的紫杉醇继续培养48 h。每孔加入MTT溶液,于常规培养箱孵育4 h,弃孔板内MTT溶液,加入DMSO溶液,用酶标仪检测570 nm处各孔的吸光度值(OD)。计算各组细胞的半数抑制浓度(IC50)和耐药逆转倍数(FR)。
1.8 克隆实验检测细胞增殖
取各组A549/Taxol细胞,用胰蛋白酶消化细胞为单细胞悬液,于培养箱中培养细胞。梯度稀释悬液,接种悬液于恒温培养皿中,置入常规培养箱孵育2周,多聚甲醛固定后0.1%结晶紫染色。PBS洗涤3次并风干后,将培养皿倒置并覆盖在透明网格上,显微镜下(低倍率)计数大于10个细胞的克隆,计算集落形成率。
1.9 Transwell小室法检测细胞侵袭能力
制备A549/Taxol细胞悬液,离心细胞悬液,弃掉培养基后清洗,将含有0.1%的胎牛血清的DMEM培养基加入到细胞中,重悬细胞并将细胞密度调整为1.5×104个/毫升。将Matrigel胶平铺于上室中,紫外线灯照射6 h消毒,将200 μl的细胞悬液加入到上室中;在下室中加入10%FBS的DMEM培养基,用37℃、5%CO2的培养箱孵育Transwell小室24 h。将上室中残留的细胞和Matrigel胶用棉签轻轻擦掉,置于甲醛溶液中固定10 min,将0.1%的结晶紫加入到上室中孵育10 min,清洗小室,将小室的底部朝上放置,显微镜下观察,随机取5~10个清晰的视野分析细胞侵袭能力。
1.10 流式细胞术检测细胞凋亡能力
取各组A549/Taxol细胞接种于96孔板中,培养24 h,分别加入含有5 μg/ml阿霉素的无血清培养基培养48 h;洗涤细胞后加入500 μl Binding Buffer溶液重悬细胞,充分混匀,分别加入5 μl Annexin V-FITC和PI溶液并充分混匀,避光孵育培养板10 min,显微镜下观察细胞凋亡情况。
1.11 蛋白质印迹检测A549/Taxol细胞中caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达
取各组A549/Taxol细胞接种于6孔培养板内,收集贴壁生长的细胞,胰酶消化得到细胞样品,RIPA裂解细胞,离心细胞后收集上清液于EP管中,取上清液为组织总蛋白,加1/5体积的6×Buffer缓冲液测定蛋白浓度。取100 μg总蛋白样品于10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白,采用5%脱脂奶粉封闭1 h。分别加入一抗caspase-3、Bcl-2、Bax抗体和内参β-actin抗体,置于4℃环境孵育过夜;PBS溶液洗膜后加入二抗,继续4℃环境孵育1 h,ECL曝光显影。
1.12 统计学方法
采用Graphpad Prism 8.0软件进行统计学分析。计量资料用均数±标准差(x±s)表示。不同组间数据采用One-way ANOVA单因素方差分析,两组间比较采用t检验,P < 0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 各细胞中SMAC mRNA表达比较
A549细胞中SMAC mRNA表达较BEAS-2B细胞明显降低(P < 0.001);pcDNA-SMAC组中SMAC mRNA表达显著高于pcDNA-NC组(P < 0.0001);siRNA-SMAC组细胞中SMAC mRNA表达明显低于siRNA-NC组(P < 0.0001),见图 1。
2.2 SMAC对A549/Taxol细胞耐药、增殖、凋亡和侵袭能力的影响
和pcDNA-NC组相比,pcDNA-SMAC组细胞IC50、细胞克隆数和侵袭能力均显著降低,细胞凋亡能力明显增加,细胞耐药指数逆转倍数为2.51倍(均P < 0.0001);和siRNA-NC组相比,siRNA-SMAC组细胞IC50、细胞克隆数和细胞侵袭能力均显著升高,细胞凋亡能力明显降低(均P < 0.0001),见图 2。
2.3 SMAC对A549/Taxol细胞中caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响
和pcDNA-NC组相比,pcDNA-SMAC组细胞中caspase-3和Bax蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白和Bcl-2/Bax比值均显著降低(P < 0.05);siRNA-SMAC组细胞中caspase-3和Bax蛋白表达显著低于siRNA-NC组,Bcl-2蛋白和Bcl-2/Bax比值明显高于siRNA-NC组(P < 0.05),见图 3。
3 讨论
中国是肺癌的高发地区,目前临床上对NSCLC的常用化疗药物为紫杉醇等[11-12]。文献显示[13-14],紫杉醇可终止细胞发生有丝分裂,进而对肿瘤的发生发展起调控作用。研究[15-16]发现,紫杉醇在乳腺癌、肺癌等多种肿瘤的治疗中起重要作用,因临床疗效显著而被广泛使用。据统计[17-18],紫杉醇在一线化疗中的有效率为50%,但由于化疗耐药导致其在二、三线的化疗中有效率仅为20%。因此,化疗耐药是导致紫杉醇治疗肿瘤失败的主要原因。本研究通过制备紫杉醇耐药肺腺癌细胞,并给予细胞SMAC表达进行干扰,观察其对肺腺癌紫杉醇耐药细胞的耐药性和细胞活性的影响。
SMAC是一种新型促凋亡蛋白质,通过抑制凋亡抑制蛋白(IAPs)从而诱导TNF受体介导的凋亡[19-20]。有研究报道[21],SMAC mRNA的转录在肺癌进展时显著降低,说明SMAC是肺癌预后的新标志,并且在原发性肺癌的形成、进展及预后中可能起重要作用。国内学者研究发现[22],SMAC释放是顺铂诱导凋亡的必需物质,而且SMAC表达水平与化疗敏感度呈正相关。SMAC低表达可导致化疗耐药,而通过转染形成的高水平SMAC可使耐药的肿瘤细胞对顺铂介导的细胞毒性作用产生敏感度。有研究发现[23],SMAC可通过调节IAP家族成员抑制食管癌细胞增殖和诱导细胞凋亡,可能成为食管鳞状细胞癌的有效治疗靶点。还有研究发现[24],SMAC可抑制结肠癌细胞增殖、诱导细胞凋亡。但目前SMAC对肺癌的作用机制研究较少。本研究转染肺腺癌紫杉醇耐药细胞高表达和低表达SMAC,结果发现高表达SMAC可降低肺腺癌细胞紫杉醇耐药,调控细胞活性;低表达SMAC可增加肺腺癌细胞紫杉醇耐药并调控细胞活性。提示,SMAC基因敲除可降低对紫杉醇耐药的肺腺癌细胞株的药物敏感度,且促进细胞增殖和侵袭,抑制细胞凋亡;反之,高表达SMAC可增加或改变原对紫杉醇耐药的肺腺癌细胞的药物敏感度,并有效调控细胞活性。曾辉等[25]研究证实,高表达SMAC可增加肺癌细胞对顺铂的敏感性,并对肺癌细胞的生长有显著抑制作用。
研究发现[26],细胞中的促凋亡蛋白和抑凋亡蛋白间的相互平衡介导细胞凋亡,其中Bcl-2和Bax是研究较广泛的促凋亡蛋白和抑凋亡蛋白,二者通常在正常的细胞中以二聚体的形式存在,可有效调控细胞的凋亡,且二者的比值介导细胞进入凋亡阶段的进程。文献显示[27],Bcl-2表达增加后可结合Bax形成异源二聚体,通过抑制Bax的活性并抑制细胞凋亡;Bax表达增加时可结合Bax形成同源二聚体,通过活化caspase-9酶切caspase-3酶原,且激活caspase-3表达对该剪切有促进作用,进而启动caspase级联反应,最终诱导细胞发生凋亡。有研究发现[28],激活Bcl-2/Bax信号通路和诱导肝癌HepG2细胞凋亡可以发挥协同作用。研究发现[29],可通过上调caspase-3和Bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达抑制子宫内膜癌细胞增殖、诱导凋亡。本研究结果显示,高表达SMAC对A549细胞中caspase-3和Bax蛋白表达起促进作用,对Bcl-2蛋白和Bcl-2/Bax比值起抑制作用;敲除SMAC则反之。陈康等[30]研究证实,Smac基因可显著改善紫杉醇耐药肺腺癌细胞株的生物活性,并激活经典凋亡信号通路,其作用机制可能与调控caspase-3表达有关。
综上所述,高表达SMAC可增加或改变原对紫杉醇耐药的肺腺癌细胞的药物敏感度,抑制细胞生长和侵袭,促进细胞凋亡,可能和调控caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路相关,但肺腺癌紫杉醇耐药细胞药物敏感度的产生机制复杂,在今后的实验中将探寻更多的作用机制,为提高肺腺癌药物敏感度提供实验依据。
Competing interests: The authors declare that they have no competing interests.利益冲突声明:所有作者均声明不存在利益冲突。作者贡献:陈康:研究设计、收集数据、查阅文献、撰写文章陈颖:协助数据整理分析、补充研究设计缺陷牛宗新:对研究进行评估及统计学图片制作康莉、祖里培亚·艾拜都拉:审阅修改文章 -
表 1 引物序列表
Table 1 Primer sequence
-
[1] Wang M, Herbst RS, Boshoff C. Toward personalized treatment approaches for non-small-cell lung cancer[J]. Nat Med, 2021, 27(8): 1345-1356. doi: 10.1038/s41591-021-01450-2
[2] Chaft JE, Rimner A, Weder W, et al. Evolution of systemic therapy for stagesⅠ-Ⅲ non-metastatic non-small-cell lung cancer[J]. Nat Rev Clin Oncol, 2021, 18(9): 547-557. doi: 10.1038/s41571-021-00501-4
[3] 赵松, 王丽丽, 欧阳明玥, 等. 间充质干细胞条件培养基对多西紫杉醇诱导多倍体肺癌细胞衰老表型的研究[J]. 中国临床实用医学, 2022, 13(2): 23-30. Zhao S, Wang LL, Ouyang MY, et al. Effects of mesenchymal stem cells-conditioned medium on senescence phenotype of polyploid lung cancer cells induced by docetaxel[J]. Zhongguo Lin Chuang Shi Yong Yi Xue, 2022, 13(2): 23-30.
[4] Ahmad I, Irfan S, Beg MMA, et al. The SMAC mimetic AT-101 exhibits anti-tumor and anti-metastasis activity in lung adenocarcinoma cells by the IAPs/caspase-dependent apoptosis and p65-NFκB cross-talk[J]. Iran J Basic Med Sci, 2021, 24(7): 969-977.
[5] Pandey SK, Paul A, Shteinfer-Kuzmine A, et al. SMAC/Diablo controls proliferation of cancer cells by regulating phosphatidylethanolamine synthesis[J]. Mol Oncol, 2021, 15(11): 3037-3061. doi: 10.1002/1878-0261.12959
[6] Jiang N, Zhang WQ, Dong H, et al. SMAC exhibits anti-tumor effects in ECA109 cells by regulating expression of inhibitor of apoptosis protein family[J]. World J Clin Cases, 2021, 9(19): 5019-5027. doi: 10.12998/wjcc.v9.i19.5019
[7] Cerna D, Lim B, Adelabu Y, et al. SMAC Mimetic/IAP Inhibitor Birinapant Enhances Radiosensitivity of Glioblastoma Multiforme[J]. Radiat Res, 2021, 195(6): 549-560.
[8] 裴彩霞, 汪晓敏, 吴永灿, 等. 桔梗皂苷D通过Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路抑制细胞凋亡保护急性肺损伤的机制研究[J]. 世界科学技术-中医药现代化, 2021, 23(10): 3551-3558. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-SJKX202110013.htm Pei CX, Wang XM, Wu YC, et al. Studies on Mechanism of Platycodin D Inhibiting Apoptosis and Protecting Acute Lung Injury Via Bax/bcl-2/caspase-3 Signaling Pathway[J]. Shi Jie Ke Xue Ji Shu-Zhong Yi Yao Xian Dai Hua, 2021, 23(10): 3551-3558. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-SJKX202110013.htm
[9] 钟大仓, 陈超, 李桐, 等. 胡椒碱诱导人胰腺癌PANC-1细胞凋亡的Caspase 3/Bax/Bcl-2信号通路机制研究[J]. 中国现代应用药学, 2020, 37(14): 1687-1691. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-XDYD202014004.htm Zhong DC, Chen C, Li T, et al. Study on the Caspase 3/Bax/Bcl-2 Signal Pathway Mechanism of Induction Apoptosis Effect of Piperine in Human Pancreatic Cancer PANC-1 Cell[J]. Zhongguo Xian Dai Ying Yong Yao Xue, 2020, 37(14): 1687-1691. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-XDYD202014004.htm
[10] 张勇, 黄念, 李秋波, 等. 阿帕替尼通过ABCB1逆转非小细胞肺癌紫杉醇耐药的机制[J]. 中华肿瘤防治杂志, 2021, 28(19): 1448-1455. doi: 10.16073/j.cnki.cjcpt.2021.19.04 Zhang Y, Huang N, Li QB, et al. Mechanism of ABCB1 reversing paclitaxel resistance in treatment of non-small cell lung cancer with Apatinib[J] Zhonghua Zhong Liu Fang Zhi Za Zhi, 2021, 28(19): 1448-1455. doi: 10.16073/j.cnki.cjcpt.2021.19.04
[11] 张华丽, 黄英莉. 小白菊内酯对紫杉醇耐药非小细胞肺癌的细胞毒性及对HDACs抑制潜力[J]. 沈阳药科大学学报, 2021, 38(6): 613-621. doi: 10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2019.1148 Zhang HL, Huang YL. Cytotoxicity of permethrin on paclitaxel-resistant NSCLC cells and potential for inhibition of HDACs[J]. Shenyang Yao Ke Da Xue Xue Bao, 2021, 38(6): 613-621. doi: 10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2019.1148
[12] Li BT, Smit EF, Goto Y, et al. Trastuzumab deruxtecan in HER2-mutant non–small-cell lung cancer[J]. N Eng J Med, 2022, 386(3): 241-251. doi: 10.1056/NEJMoa2112431
[13] 张汀荣, 陆向东, 张瑶, 等. CTEN通过TGF-β1促进非小细胞肺癌细胞紫杉醇耐药的作用及机制研究[J]. 现代肿瘤医学, 2021, 29(12): 2035-2040. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-SXZL202112004.htm Zhang TR, Lu XD, Zhang Y, et al. CTEN induces paclitaxel resistance in non-small cell lung cancer cells via TGF-β1[J]. Xian Dai Zhong Liu Yi Xue, 2021, 29(12): 2035-2040. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-SXZL202112004.htm
[14] Yang Y, Wang Y, Che X, et al. Integrin α5 promotes migration and invasion through the FAK/STAT3/AKT signaling pathway in icotinib-resistant non-small cell lung cancer cells[J]. Oncol Lett, 2021, 22(1): 556. doi: 10.3892/ol.2021.12817
[15] 刘海君, 赵俊刚. 长链非编码RNA LINC00520调控IGF2BP1介导肺腺癌细胞对紫杉醇化疗耐药的影响[J]. 重庆医学, 2021, 50(8): 1266-1271. doi: 10.3969/j.issn.1671-8348.2021.08.002 Liu HJ, Zhao JG. LINC00520 mediates drug resistance of lung adenocarcinoma cells to paclitaxel chemotherapy by regulating IGF2BP1[J]. Chongqing Yi Xue, 2021, 50(8): 1266-1271. doi: 10.3969/j.issn.1671-8348.2021.08.002
[16] Zhou D, Xia Z, Xie M, et al. Exosomal long non-coding RNA SOX2 overlapping transcript enhances the resistance to EGFR-TKIs in non-small cell lung cancer cell line H1975[J]. Hum Cell, 2021, 34(5): 1478-1489. doi: 10.1007/s13577-021-00572-6
[17] Ma CS, Lv QM, Zhang KR, et al. NRF2-GPX4/SOD2 axis imparts resistance to EGFR-tyrosine kinase inhibitors in non-small-cell lung cancer cells[J]. Acta Pharmacol Sin, 2021, 42(4): 613-623.
[18] 王晗, 陈昊, 王博文, 等. 紫檀芪提高肺癌化疗耐药细胞对紫杉醇敏感性的研究[J]. 宁夏医科大学学报, 2020, 42(2): 135-139, 144. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-XNXY202002008.htm Wang H, Chen H, Wang BW, et al. Pterostilbene Increases the Sensitivity of Chemotherapy Resistant Lung Cancer Cells to Paclitaxel[J]. Ningxia Yi Ke Da Xue Xue Bao, 2020, 42(2): 135-139, 144. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-XNXY202002008.htm
[19] Paul A, Krelin Y, Arif T, et al. A new role for the mitochondrial pro-apoptotic protein SMAC/Diablo in phospholipid synthesis associated with tumorigenesis[J]. Mol Ther, 2018, 26(3): 680-694.
[20] Guttà C, Rahman A, Aura C, et al. Low expression of pro-apoptotic proteins Bax, Bak and Smac indicates prolonged progression-free survival in chemotherapy-treated metastatic melanoma[J]. Cell Death Dis, 2020, 11(2): 124.
[21] 赵玉芳, 金敬顺, 赵玉玲. Smac蛋白与肺癌的研究进展[J]. 广西医科大学学报, 2015, 32(1): 152-154. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-GXYD201501057.htm Zhao YF, Jin JS, Zhao YL. Research progress of Smac protein and lung cancer[J]. Guangxi Yi Ke Da Xue Xue Bao, 2015, 32(1): 152-154. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-GXYD201501057.htm
[22] 王希方, 秦思达, 刘屹, 等. Smac类似物BV6泛素化对肺癌细胞A549迁移的影响[J]. 中国临床研究, 2019, 32(11): 1462-1465. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZGCK201911002.htm Wang XF, Qin SD, Liu Y, et al. Effect of Smac analogue BV6 ubiquitination on A549 migration in lung cancer cells[J]. Zhongguo Lin Chuang Yan Jiu, 2019, 32(11): 1462-1465. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZGCK201911002.htm
[23] Jiang N, Zhang WQ, Dong H, et al. SMAC exhibits anti-tumor effects in ECA109 cells by regulating expression of inhibitor of apoptosis protein family[J]. World J Clin Cases, 2021, 9(19): 5019-5027.
[24] Qiu W, Liu H, Sebastini A, et al. An apoptosis-independent role of SMAC in tumor suppression[J]. Oncogene, 2013, 32(19): 2380-2389.
[25] 曾辉, 黄绪群, 蔡煜, 等. RNA干扰敲除Smac基因的表达促进人肺癌细胞的生长及增强顺铂耐药性[J]. 中华临床医师杂志(电子版), 2012, 6(11): 2895-2899. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZLYD201211014.htm Zeng H, Huang XQ, Cai Y, et al. Knockdown of Smac expression by RNAi enhances growth and cisplatin resistance of human lung cancer cells[J]. Zhonghua Lin Chuang Yi Shi Za Zhi (Dian Zi Ban), 2012, 6(11): 2895-2899. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZLYD201211014.htm
[26] 李全志, 刘志强, 赵玉霞, 等. 榄香烯对人肺癌A549细胞系耐顺铂细胞株多药耐药的改善作用及机制研究[J]. 浙江中医药大学学报, 2021, 45(1): 16-22. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-BHON202101003.htm Li QZ, Liu ZQ, Zhao YX, et al. Study on the Improvement Effect and Mechanism of Elemene on Multidrug Resistance of Eisplatin-resistant Human Lung Cancer A549 Cell Line[J]. Zhejiang Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao, 2021, 45(1): 16-22. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-BHON202101003.htm
[27] Miao R, Xu X, Wang Z, et al. Synergistic effect of nutlin-3 combined with aspirin in hepatocellular carcinoma HepG2 cells through activation of Bcl-2/Bax signaling pathway[J]. Mol Med Rep, 2018, 17(3): 3735-3743.
[28] 李伟宏, 田莉, 刘俊保. 莪术油对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖、凋亡及Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达的影响[J]. 河南中医, 2021, 41(3): 384-387. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-HNZY202103016.htm Li WH, Tian L, Liu JB. The Effects of Zedoary Turmeric Oil on Proliferation and Apoptosis and Expressions of Caspase-3 and Bax and Bcl-2 in HEC-1-B[J]. Henan Zhong Yi, 2021, 41(3): 384-387. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-HNZY202103016.htm
[29] 潘飞豹, 柯莉, 蒋丝丽, 等. 姜黄素通过调节Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路活性保护脑出血大鼠神经细胞的实验研究[J]. 中西医结合心脑血管病杂志, 2021, 19(22): 3897-3902. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZYYY202122012.htm Pan FB, Ke L, Jiang SL, et al. Curcumin protects neurons in rats with intracerebral hemorrhage by regulating the activity of Bcl-2/Bax/Caspase-3 signal pathway[J]. Zhong Xi Yi Jie He Xin Nao Xue Guan Za Zhi, 2021, 19(22): 3897-3902. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZYYY202122012.htm
[30] 陈康, 苟安栓, 朱佳, 等. Smac调控Caspase-3对耐药肺腺癌细胞株生物活性及相关信号的研究[J]. 现代生物医学进展, 2022, 22(21): 4027-4034. Chen K, Gou AS, Zhu J, et al. Study on the Biological Activity and Related Signals of Caspase-3 Regulated by Smac in Drug Resistant Lung Adenocarcinoma Cell Lines[J]. Xian Dai Sheng Wu Yi Xue Jin Zhan, 2022, 22(21): 4027-4034.