肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是常 见的消化道恶性肿瘤之一，发病率居我国恶性肿 瘤的第三位。治疗首选手术切除，但因该病发展 隐匿，早期诊断困难，且术后复发率高^[1]。因此早 期诊断及预防术后复发是保障治疗效果的关键。 关于肝癌的早期诊断和复发研究中，某些生长因 子水平的变化是当前研究的新热点。上皮型钙黏 连蛋白(E-钙黏连蛋白，E-cadherin)是上皮细胞中 重要的细胞黏附与信号转导分子，参与了多种肿 瘤的发生。E-cadherin是Cadherin家族重要成员之 一，主要分布在上皮组织中，其表达减弱甚至缺 失是肺癌进展、淋巴结转移的关键环节之一^[2]。我 们的前期研究发现^[3]，E-钙黏连蛋白的表达与肝癌 的浸润和转移密切相关。与肿瘤组织标本相比， 血清学指标具有简便、重复性好、便于随访等优 点。虽然甲胎蛋白（alpha fetoprotein,AFP）作为 肝癌辅助诊断指标的重要地位已被公认^[4]，但仍有 30%~40%的肝癌患者血清AFP呈阴性^[5]。因此，对 这类患者寻求敏感的血清诊断标志物，具有重要 的临床意义。最近，有研究发现^{[6, 7]}，血清中可溶 性E-钙黏连蛋白(soluble E-cadherin，sEC)高表达于 卵巢癌、胃癌，但在肝癌患者血清中sEC尚未见报 道，且其与AFP在肝癌中的诊断价值如何？因此， 本研究测定HCC患者术前、术后血清sEC和AFP水 平，对HCC早期诊断和复发进行监测，以达到早期 诊断和判断预后。 1 资料与方法 1.1 一般资料

监测对象取自在柳州市人民医院肝细胞癌行 根治性切除术患者105例，其中男64例，女41例， 年龄27~70岁，平均年龄49岁。HCC诊断以UICC^[8] 为标准，所有研究对象均为初治病例，术前均未 接受过任何药物治疗或放疗。手术患者术后定期 随访，术后第1年每月1次，第2年后每2月1次，检 查内容包括AFP、sEC，肝功能测定和影像学检查 (肝脏B型超声、CT、MRI或血管造影等)，当AFP 或sEC水平异常增高时，则随访改为每月1次。随 访采用门诊复查、电话及书信进行。随访至2012 年10月30日截止，随访时间为3~58月，中位随访 时间为25.2月。其中有17例患者失访。最后确诊 为HCC术后复发的患者47例，其中男34例，女13 例，年龄29~68岁，平均年龄50岁。复发时，AFP 阳性(≥100 ng/ml)29例，AFP阴性(<20 ng/ml)18 例；复发肿瘤与原发灶位于一侧半肝内27例，位 于对侧半肝或全肝受累9例，位于同一肝段内11 例。复发肿瘤单个或多个结节相加直径为1.3~4.5 cm，平均值为2.8 cm；复发时间4~54月，平均值 10.6月；复发前手术情况：1次手术后复发36例， 2次手术后复发8例，3次手术后复发3例。同时收集 同期健康体检者70例作为健康对照，其中男41例， 女29例，年龄25~64岁，平均年龄47岁。健康体检 者血细胞计数、血脂、肝肾功能均在正常范围。本 研究经医院伦理委员会批准，所有对象均签署知情 同意书。 1.2 血清样本收集与处理

患者手术前与手术后第7~9天的外周血采集后 立即放入4℃冰箱静置20 min。4℃ 4 000 r/min离心 15 min分离血清。将血清转移到新的离心管中，放 入－80℃冰箱保存。检测前取出血清样品，冰上 融化后，4℃ 12 000 r/min离心10 min，除去血清中 的不溶物。sEC的血清水平采用ELISA方法检测。 ELISA试剂盒购自美国R＆D公司。操作主要步骤 如下：(1)向反应板孔中分别加入5 μl标准品稀释血 清；(2)向反应板孔中加入200 μl生物素标记的抗 E-cadherin，37℃温育30 min，洗板;(3)向反应板孔 中加入150 μl辣根过氧化物酶，37°C温育30 min， 洗板；(4)每孔中加入100 μl TMB显色液，暗室室 温下温育20 min；(5)每孔中加入100 μl终止液。15 min内检测450 nm处吸光值(A)，并绘制标准曲线， 根据血清样品的A值通过标准曲线计算其浓度。 AFP采用放射免疫法，AFP正常值为0~20 ng/ml， 以AFP≥20ng/ml为肝癌诊断阳性，以sEC≥2 100 ng/ml为肝癌诊断阳性^{[6, 7]}。 1.3 统计学方法

采用SPSS17.0软件包进行分析，采用均数±标 准差（x ±s）表示，组间均数用t检验，相关性采用 直线相关分析，P＜0.05为差异具有统计学意义。 2 结果 2.1 sEC与AFP对术前肝癌诊断及术后肝癌复发诊 断的相关性分析

相关分析表明，sEC与AFP两者在肝细胞癌术 前血清水平呈正相关 (r=0.631，P<0.01)；sEC与 AFP两者在肝细胞癌术后复发血清水平也呈正相关 性(r=0.324，P<0.05)；而sEC与AFP两者在肝细胞 癌术后血清水平没有相关性(r=0.198，P>0.05)。

检测sEC敏感度高，AFP特异性高；且检测 sEC明显提高肝癌检出的阳性预测值。在对所有的 检测指标的敏感度、特异性、阳性预测值及阴性 预测值的比较发现，sEC均超过82.0%，见表 1。

表 1(Table 1)

表 1 两种标志物对肝细胞癌诊断价值比较 Table 1 The clinic diagnostic significance of tumour biomarkers sEC and AFP in HCC Note:HCC: hepatocellular carcinoma;AFP: alpha fetoprotein;sEC： soluble E-cadherin

表 1 两种标志物对肝细胞癌诊断价值比较 Table 1 The clinic diagnostic significance of tumour biomarkers sEC and AFP in HCC

肝细胞癌患者术前sEC为（2 652.5±221.7）ng/ ml，健康人sEC为（1 989.6±213.4）ng/ml，两者比 较差异有统计学意义（P<0.01）。肝细胞癌患者 术后sEC为（2 011.8±189.8）ng/ml，较术前水平明 显下降，比较差异有统计学意义（P<0.01）。肝 细胞癌患者术前血清AFP为（609.7±53.3）ng/ml， 明显高于术后和健康人血清AFP值，比较差异有统 计学意义（P<0.01），见表 2。

表 2(Table 2)

表 2 健康人及HCC患者手术前后和确诊复发时AFP和sEC 值的变化（x ±s） Table 2 The serum concentrations of AFP and sEC between pre-and postoperation and recurrence in HCC with healthy control(x±s) Notes: *:P<0.01,vs.preoperation;△:P<0.05,vs.postoperation;**:P<0.01,vs. health control;#:P<0.05,vs.health control

表 2 健康人及HCC患者手术前后和确诊复发时AFP和sEC 值的变化（x ±s） Table 2 The serum concentrations of AFP and sEC between pre-and postoperation and recurrence in HCC with healthy control(x±s)

确诊复发患者血清sEC的浓度为（2 343.6± 280.1）ng/ml，明显高于术后和健康对照血清sEC 的浓度，差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。 确诊复发患者血清AFP的浓度为（103.6±28.7） ng/ml，高于术后和健康对照，但差异无统计学意 义（P均＞0.05），见表 2。另6例术后复发的HCC 患者，AFP一直为阴性，影像学检查已经发现肝占 位病变，而sEC水平已在此前1~6月明显增高。 2.4 肝细胞癌患者术前血清sEC、AFP水平与临床 病理特征的关系

结果显示血清sEC表达与肝细胞癌临床分期 及分级显著相关，分期较晚及低分化患者的血清 sEC浓度较早期患者明显升高，差异有统计学意义 (P<0.01)；此外血清sEC浓度低有无门静脉癌栓、 腹水、有无包膜之间差异有统计学意义(P<0.05)； 但在不同年龄组及肿瘤大小之间差异无统计学意 义(P>0.05)。而术前AFP水平仅与肝细胞癌TNM分 期密切相关(P<0.05)，与年龄、肿瘤大小、肿瘤分 级、有无门静脉癌栓、有无包膜无关(P>0.05)，见 表 3。

表 3(Table 3)

表 3 HCC病理学参数与血清sEC和AFP水平的关系(ng/ml) Table 3 Correlation between sEC and AFP expression levels and clinicopathological factors in HCC(ng/ml)

表 3 HCC病理学参数与血清sEC和AFP水平的关系(ng/ml) Table 3 Correlation between sEC and AFP expression levels and clinicopathological factors in HCC(ng/ml)

AFP是肝细胞癌的重要标志物，它在肝细胞癌 组织及患者血液中的高表达以及AFP作为肝细胞 癌的辅助诊断指标的重要地位已被公认^[9]，但仍有 30%~40%的原发性肝癌患者血清AFP呈阴性^[5]。因 此，对这类患者寻求敏感的血清诊断标志物，具 有重要的临床意义。

E-钙黏连蛋白（E-cadherin）是维持上皮细胞 的极性及细胞间连接的糖蛋白，在肿瘤的早期发 生、浸润和转移中均起着重要作用^[10]。目前，关 于血清sEC水平与肝癌术前诊断和术后复发预后间 的关系尚未见文献报道。鉴于临床上肝癌易转移 复发的特点，因此针对sEC在其中的研究则显得尤 为重要。我们在前期研究的基础上，通过酶联免 疫吸附法检测肝细胞癌患者血清中sEC的表达水 平，同时检测血清AFP的变化，探讨其与肝癌临床 病理指标和复发预后间的关系。结果显示，在对 AFP、sEC两者肝癌血清学检测的相关性研究中发 现，AFP、sEC在术前及术后复发血清水平均呈正 相关(r=0.631，P<0.01；r=0.324，P<0.05)。 我们 大胆地推测，sEC可作为象AFP一样的肝癌的血清 检测标志物。

本研究显示，肝癌患者术前、复发时血清中 sEC、AFP的浓度明显高于术后和健康对照组，且 在确诊复发患者血清sEC的浓度为明显高于术后 和健康对照血清sEC的浓度，差异均有统计学意义 （P<0.05，P<0.01）。而血清AFP的浓度虽然也升 高，但与术后和健康对照相比较差异无统计学意 义（P均>0.05），表明sEC较AFP能更好地预测肝 癌的复发。同样地，我们对6例术后复发的AFP一 直为阴性的HCC患者的sEC水平比较，也证实了这 一点。因而推测，肝癌发生及术后复发与sEC更密 切相关。

我们还发现：sEC浓度与肝细胞癌临床分期、 分级、有无门静脉癌栓、腹水、有无包膜显著相 关(P<0.05)，但与不同年龄组及肿瘤大小，差异无 统计学意义(P>0.05)。而术前AFP水平仅与肝细胞 癌TNM分期密切相关(P<0.05)，与年龄、肿瘤大 小、肿瘤分级、有无门静脉癌栓、有无包膜相关 无关(P>0.05)，表明术前检测sEC能更好地判断肝 癌的预后。

尽管大量研究表明sEC在许多上皮肿瘤中表 达，如已有研究表明血清sEC水平是胃癌预后的独 立预测因子之一，而我们的研究发现sEC浓度与肿 瘤大小无关，表明不同上皮性癌症患者血清中sEC 水平有一定的差异，这可能与sEC在不同肿瘤组织 中的作用机制不同有关，但目前对sEC具体机制仍 未完全清楚。其可能的机制为：(1) sEC通过介导 细胞与细胞外基质的黏附活动，促使肿瘤转移； (2) sEC能够刺激血管内皮细胞的迁移，促使新生 血管的形成，而肿瘤转移灶的形成与新生血管密 切相关。故sEC对肝细胞癌的发生发展所起的具体 作用机制有待进一步研究。