人核黄素转运蛋白RFT2基因单核苷酸多态性与食管鳞癌遗传易感性的关系
  肿瘤防治研究  2014, Vol. 41 Issue (12): 1348-1351
本刊由国家卫生和计划生育委员会主管,湖北省卫生厅、中国抗癌协会、湖北省肿瘤医院主办。
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文章信息

魏武,马良,徐延钧,王也煜,李丹,纪爱芳. 2014.
WEI Wu, MA Liang, XU Yanjun, WANG Yeyu, LI Dan, JI Aifang. 2014.
人核黄素转运蛋白RFT2基因单核苷酸多态性与食管鳞癌遗传易感性的关系
RFT2 Functional SNP Influences Hereditary Susceptibility to Esophageal Squamous Cell Carcinoma
肿瘤防治研究, 2014, 41(12): 1348-1351
Cancer Research on Prevention and Treatment, 2014, 41(12): 1348-1351
http://www.zlfzyj.com/CN/10.3971/j.issn.1000-8578.2014.12.021

文章历史

收稿日期:2014-01-18
修回日期:2014-09-03
人核黄素转运蛋白RFT2基因单核苷酸多态性与食管鳞癌遗传易感性的关系
魏武1, 马良1, 徐延钧2, 王也煜1, 李丹1, 纪爱芳1    
1.046000 长治,长治医学院附属和平医院 中心实验室
2.046000 长治,长治医学院附属和平医院肿 瘤外科
摘要目的 探讨人核黄素转运蛋白RFT2基因中1172C>T位点单核苷酸多态性(SNP)与食管鳞癌 (ESCC)遗传易感性的关系。方法 磁珠法提取全血基因组DNA,包括240例食管癌患者和198例健 康对照人群。PCR扩增目的片段后直接测序,分析RFT2基因的SNP1172C>T位点的基因型频率及其与 食管癌的易感性关系。结果 食管癌患者与健康对照人群RFT2 SNP1172C>T的基因型频率有显著差 异(χ2=13.10, P=0.001)。分析1172C>T位点显示,与C/C相比,C/T和T/T基因型降低食管癌发生率 (OR=0.66, 95%CI: 0.41~1.05)。结论 RFT2基因功能区SNP1172C>T与食管癌的遗传易感性相关。
关键词RFT2     食管鳞癌     单核苷酸多态性    
RFT2 Functional SNP Influences Hereditary Susceptibility to Esophageal Squamous Cell Carcinoma
WEI Wu1, MA Liang1, XU Yanjun2, WANG Yeyu1, LI Dan1, JI Aifang1    
1. Medical and Scientific Center of Guangxi Medical University, Nanning 530021, China;
2.Department of Gynecological Oncology, Tumor Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530021, China
AbstractObjective To explore the association of RFT2 functional SNP1172C>T and hereditary susceptibility to esophageal squamous cell carcinoma(ESCC). Methods Whole blood genomic DNA were extracted from 240 ESCC patients and 198 healthy people by paramagnetic particle method. RFT2 SNP 1172C>T was determined by sequencing after DNA purification and amplification. The frequency and its correlation with susceptibility to ESCC were then analyzed. Results Overall genotype frequencies of the RFT2 SNP1172C>T in ESCC patients were significantly different from those in healthy controls(χ2=13.10, P=0.001) For 1172C>T, C/T and T/T genotype did not show a relationship with the risk of ESCC, compared with C/C genotype(OR=0.66, 95%CI:0.41-1.05). Conclusion There is a close relationship between SNP1172C>T in RFT2 and hereditary susceptibility to ESCC.
Key words: RFT2     Esophageal squamous cell carcinoma(ESCC)     Single nucleotide polymorphism    
0 引言

2010年我们既往研究中曾对2.5万余食管 鳞癌和正常对照人群进行全基因组关联分析 (GWAS),发现了位于染色体20p13的食管癌 易感基因Chromosome 20 opening reading frame 54 (C20orf54)[1]。C20orf54也被称为人核黄素转运 蛋白2(human riboflavin transporter 2,RFT2),在 人体吸收核黄素的过程中起关键作用,机体缺少核 黄素是食管癌发生的危险因素之一[2]。有研究显示 膳食补充核黄素能明显降低食管癌的患病风险[3]。 目前关于RFT2基因与食管癌遗传易感性关系的报 道很少。本研究初步探讨RFT2基因功能区单核苷 酸多态性与食管癌易感性的关系。 1 资料与方法 1.1 研究对象

2009年—2012年于长治医学院附属和平医院行 胃镜检查并证实无食管、贲门及胃黏膜癌变的健 康人群198例;经病理证实为食管鳞癌患者240例。 1.2 全血基因组DNA提取

Maxwell®16 System提取全血DNA用于PCR反应。 1.3 基因分型

以提取出来的全基因组DNA为模板,扩增目 的片段,引物[4]如下:上游引物:5'-GGAGTTCC CAGAGCTTTGGTGTCCG-3';下游引物:5'-CAT AGGACAGGCAGGAGTAGGT- 3'。PCR产物行2% 琼脂糖凝胶电泳鉴定,将PCR产物送至北京华大 基因科技有限公司直接测序。 1.4 统计学方法

采用SPSS17.0统计学软件分析。对各组人群 SNP1172C>T位点基因型分布进行Hardy-Weinberg 平衡检验,各组间基因型分布频率采用χ2检验,各 基因型与食管癌的易感性关系采用Logistic回归检 验,P<0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 研究人群及特点

食管癌组平均年龄(58.4±7.9)岁;健康对 照组平均年龄(56.9±9.3)岁;各组在年龄、性 别分布上差异均无统计学意义(P=0.076)。食 管癌组和健康对照组在吸烟人数构成方面的差 异无统计学意义,然而,饮酒者在食管癌组中的 比例(46.7%)明显高于健康对照组(37.2%) (P=0.045)。因此饮酒可显著增加人群食管癌 的发病风险,经性别、年龄状况校正后的OR值 为1.78(95%CI:1.12~2.83)。UGIC家族史在 食管癌中的比例(27.5%)明显高于健康对照组 (18.2%)(P=0.014)。因此UGIC家族史可显著 增加人群食管癌的发病风险,经性别、年龄状况 校正后的OR值为1.75(95%CI:1.10~2.79)。不 同BMI指数的人群在食管癌组与健康对照组分布 显著不同(P=0.000),相对于BMI>24的人群, BMI<18.5和BMI为18.5~24之间的人群显著增加 了ESCC的发病风险,经性别、年龄状况校正后 的OR值分别为4.52(95%CI:2.34~8.72)和2.70 (95%CI:1.67~4.37),见表 1

表 1 食管癌组和健康对照组人口学特征比较 Table 1 Demographic characteristics of ESCC patients and healthy controls
2.2 基因分型

PCR扩增产物送华大基因科技有限公司测序, 所有样本测序成功,见图 1

图 1 RFT2基因SNP1172C>T的各基因型测序结果 Figure 1 DNA sequencing of RFT2 SNP 1172C>T in ESCC patients and healthy controls
2.3 SNP 1172C>T位点与食管鳞癌发生的危险性 分析结果

在食管癌和健康对照组中C/C、C/T和T/T各 基因型的频率差异具有统计学意义(χ2=13.10,P =0.001)。对吸烟、饮酒、家族史和体质指数等因 素分层后进行条件Logistic回归分析,结果显示在 不吸烟组中,与C/C相比,C/T和T/T基因型显著降低食管癌发生率(经年龄和性别校正后OR=0.47, 95%CI:0.23~0.97)。在无UGIC家族史的人群 中,与C/C相比,C/T和T/T基因型显著降低食管 癌发生风险性(经年龄和性别校正后的OR=0.57, 95%CI:0.34~0.98)。相反地,在有UGIC家族史 的人群中,C/T和T/T基因型都能增加食管癌发生 的风险性,但是差异无统计学意义,见表 2

表 2 SNP 1172C>T位点与食管癌发生的危险性关联分析 Table 2 Association of RFT2 SNP 1172C>T with the risk of ESCC
3 讨论

食管癌的发生和发展是环境因素和遗传因素 共同作用影响的结果[5]。有研究表明吸烟和饮酒作 为两个重要的环境因素,在食管癌的发生发展中 起了重要的作用[6];欧阳刚等[7]的研究表明食管癌患者常伴有家族史现象,这说明基因遗传和环境 因素是食管癌高发区发病的危险因素。然而,在 中国的食管癌高发区吸烟与饮酒似乎是食管癌发 生的次要危险因子[8],王立东等[9]对长治地区林州 移民的研究发现,环境和时间变化未明显影响食 管癌及癌前病变的发生率,而是遗传因素对食管 癌的发生发展起重要作用。

本研究发现饮酒、体质指数和家族史与食管 癌的发生发展密切相关,表明RFT2基因的表达与 吸烟饮酒引起的代谢变化相互作用,并进一步影 响食管癌的发生。

在对我国食管癌高发区——河南林州的居民 膳食状况与红细胞谷胱甘肽还原酶活性调查结果 表明:核黄素缺乏是我国食管癌高发区一个共同 的营养问题[10],即高发区人群核黄素摄入不足, 机体内核黄素的水平均低于正常。鉴于此,我国 研究人员先后在食管癌高发区人群中实施核黄素 强化营养盐的干预措施,结果表明核黄素强化营 养盐可增加机体内的核黄素水平,改善食管黏 膜的“状态”,延缓和逆转食管癌前病变的发展进 程,降低食管癌的发病风险及发病率,但干预效 果存在明显的个体差异[9, 11]。我们推测食管癌发生 还可能与RFT2基因功能区的错义cSNP密切相关, RFT2基因功能区的错义cSNP很可能是膳食补充核 黄素所引起的干预效果存在明显个体差异的分子 基础。本研究分析了RFT2基因的SNP1172C>T位 点的突变情况,发现食管癌患者中1172C>T位点 C/C基因型更为常见,这表明在食管癌发生发展过 程中,随着食管癌关键易感基因的突变,RFT2基 因会发挥相对增强核黄素转运的能力,促进食管 黏膜修复。

此外,RFT2基因1172C>T位点杂合子较纯 合子罹患食管癌的风险显著降低,可能为在长期 的人类进化过程中,人类与自然不断斗争适应环 境进而生存的结果。我们的研究显示RFT2基因 1172C>T位点在不吸烟组中杂合子较纯合子罹患 食管癌的风险显著降低,可能也是人类进化的一 种体现。RFT2基因1172C>T位点在无UGIC家族史 的人群中,杂合子较纯合子罹患食管癌的风险显 著降低,但在有UGIC家族史的人群中,RFT2基因 1172C>T位点C/T和T/T基因型都能增加食管癌发生 的风险,但是差异无统计学意义,提示遗传背景 因素在食管癌发生发展中也可能起重要作用。

总之,我们的初步研究显示RFT2基因功能区 SNP1172C>T 位点与食管癌遗传易感性相关。

参考文献
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人核黄素转运蛋白RFT2基因单核苷酸多态性与食管鳞癌遗传易感性的关系
魏武, 马良, 徐延钧, 王也煜, 李丹, 纪爱芳